Приложение 10 (Обязательное)
Методика контроля содержания микроорганизмов в воздухе рабочей зоны
1. Общие положения
1.1. Методика определяет требования к измерению в воздухе рабочей зоны концентраций микроорганизмов, живых клеток и спор, находящихся в составе товарных форм препаратов на предприятиях по производству препаратов методом биосинтеза, а также помещений общественных и промышленных зданий.
1.2. К использованию в технологических процессах допускаются штаммы микроорганизмов, разрешенные департаментом госсанэпиднадзора Минздрава России.
1.3. Контроль воздуха на содержание вредных веществ биологической природы – продуктов микробного синтеза (ферменты, витамины, антибиотики и др.) проводится так, как это принято для химических веществ.
2. Требования к отбору проб
2.1. Отбор проб воздуха для контроля содержания микроорганизмов проводится путем аспирации их из воздуха на поверхность плотной питательной среды.
2.2. Отбору проб должна предшествовать краткая характеристика микроорганизмов: указывается семейство, род, вид, штамм, морфологическая характеристика колоний на твердой питательной среде и оптимальные условия роста колоний на твердой питательной среде (РН, Т°).
2.3. Отбор проб воздуха проводят:
– при засеве инокуляторов в зоне дыхания и между инокуляторами;
– при отборе проб из инокуляторов;
– при засеве посевных аппаратов (при условии прямого засеивания);
– при отборе проб из посевных аппаратов у пробника и между посевными аппаратами;
– при отборе проб из ферментеров;
– при спуске культуральной жидкости из ферментеров в коагуляторы или прямо на фильтрацию.
Если в технологическом процессе имеет место сушка биомассы, то отбор проб проводится:
– при перемешивании;
– при выгрузке из сушильных аппаратов;
– при фасовке биомассы.
Перечисленные точки отбора ориентировочные и на каждом предприятии устанавливаются индивидуально с учетом данных валидации, характеристик процесса, методологии тестирования и т. п.
2.4. При текущем контроле в одном помещении число контрольных точек должно быть не менее трех
2.5. Для сравнительного анализа концентраций микроорганизмов в воздухе рабочей зоны отбор проб должен проводиться не реже 1 раза в неделю в аналогичный по интенсивности технологического процесса временной период
2.6. Объем пробы воздуха должен быть достаточным для обнаружения микроорганизмов Он устанавливается опытным путем с учетом характеристик используемого пробоотборника и концентрации микроорганизмов в тестируемой зоне
Примечание. Для импакторов и центрифужных пробоотборников одним из ограничивающих факторов является высыхание поверхности агара при больших объемах проб, а также возможность повреждения поверхности агарового слоя (растрескивание)
2.7 Отбор проб на содержание микроорганизмов проводят в рабочей зоне, высота установки прибора 1,5 м от уровня пола.
3. Характеристика метода
3.1. Метод основан на аспирации микроорганизмов из воздуха на поверхность плотных элективных питательных сред (специфичных для данного микроорганизма) и подсчета выросших колоний по типичным морфологическим признакам.
3.2. В специфическую питательную среду добавляют вещества (этиловый спирт, нефтепродукты, антибиотики и т. п.) для подавления посторонней микрофлоры, в зависимости от особенностей изучаемого штамма.
3.3. Отбор проб проводится с концентрированном воздуха на чашке Петри с посевной средой.
Примечание.
1. Выбор питательной среды является важным фактором Базовой средой для бактерий является среда № 1 (по ГФ, изд. XI, вып. 2., с 200*) и среда № 2 (агар Сабуро) для дрожжей и грибов. Посевы на среде № I инкубируются при температуре от 30 до 35 °С в течение 48 ч, на агаре Сабуро – от 20 до 25 °С в течение 72 ч.
2. Перед исследованием разлитые на чашки Петри или на пластины питательные среды необходимо выдержать в термостате при температуре от 30 до 35 °С в течение 24 ч для подтверждения их стерильности. Проросшие чашки бракуют.
3. Ростовые свойства питательных сред должны быть проверены соответствующими тест-штаммами (для среды № I и среды № 2 по ГФ, изд. XI, вып 2, с. 208 «Требования к ростовым свойствам питательных сред»).
3.4 Предел измерения от 0,5 до до 2–106 КОЕ/м3.
3 5. Выявленные в процессе отбора пробы воздуха микроорганизмы подлежат обязательной макроскопической (форма, цвет, консистенция колоний) и микроскопической идентификации окрашенных по Грамму мазков Результаты исследований должны регистрироваться в документах, где указывают основные морфологические признаки: отношение к окраске по Грамму, наличие или отсутствие спорообразования, форма микроорганизмов (кокки, палочки, овоиды и т.п.).
В процессе идентификации микроорганизмов могут быть использованы биохимические тест-системы, идентификационные автоматизированные системы, а также любые современные методы идентификации микроорганизмов
4. Приборы и посуда
4 1. Для бактериологического анализа воздуха используют импактор воздуха микробиологический «Флора-100» (ТУ 64–098– 33–95)
Примечание. Современная отечественная модель – высокопроизводительный импактор «Флора 100» работает в автоматическом режиме, отбирает заданный объем воздуха и осаждает биологический аэрозоль на чашку Петри с плотной питательной средой. Импактор полностью заменяет широко используемый для контроля прибор Кротова и превосходит его по всем техническим характеристикам (точность определения, масса, габариты, скорость пробоотбора, автоматический контроль параметров пробоотбора и диагностики неисправностей).
Импактор «Флора-100» прошел государственные испытания и рекомендован Комитетом по новой технике (протокол № 7 от 26. 12. 95) к применению в медицинской практике.
4.2. Методику проведения контроля с использованием импактора «Флора-100» рекомендуется согласовывать с разработчиком импактора для уточнения времени аспирации в зависимости от особенностей контролируемой микрофлоры.
4.3. Прибор для бактериологического анализа воздуха, модель 818 ТУ 64–1–791 –77
4.4. Секундомер ГОСТ 9586–75
4.5. Чашки бактериологические, плоскодонные, стеклянные диаметром 100 мм ГОСТ 10937–75
4.6. Термостаты электрические суховоздушные, типа ТС, ТУ 64–1–1382–76
4.7. Пипетки мерные ГОСТ 1770–74
4.8. Колбы конические ГОСТ 1770–74
4.9. Весы аналитические ВЛА-200-М
4.10. Камера для стерильной сушки чашек Петри типа ЕМЗ 804–014СП
* Государственная Фармокопея СССР XI издания, вып. 2
5. Методика проведения контроля
5.1. Воздух аспирируют со скоростью от 20–30 до 150–200 л/мин на поверхность питательной (посевной) среды на чашках Петр.
5.2. Время аспирации 2–5 мин
5.3. Инкубирование отобранных из воздуха проб производится в зависимости от выделяемых микроорганизмов в диапазоне температур от 27–28 до 41–42 °С При оценке пигментообразования чашки Петри дополнительно (после инкубирования) выдерживают 48 ч при комнатной температуре.
Скачать реферат